SUBPROGRAMA DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR EN TUMORES SOLIDOS

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SUBPROGRAMA DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR EN TUMORES SOLIDOS

Subcordinadora: Dra T Caldes, Hospital de San Carlos, Madrid1. Justificación del subprograma

El cáncer hereditario supone un 10% de todos los tumores. El 90% restante son de naturaleza esporádica, siendo los cánceres de colon/recto, mama y pulmón los más prevalentes. El avance en el conocimiento de los mecanismos moleculares responsables del desarrollo de estos tumores, ha conducido a una demanda social de su diagnóstico desde el punto de vista molecular.

Ámbitos de servicio: PCR cuantitativa; Secuenciación, PCR-DGGE, Inmunohistoquímica, Estudio de grandes reordenamientos de ADN, Análisis de fragmentos de secuencias repetitivas, Zimografía de proteínas con actividad enzimática, Genómica.

Estructura de trabajo del programa (a desarrollar por el coordinador del programa de diagnóstico molecular)

2. Objetivos1.- Coordinar la actividad de los laboratorios de diagnóstico molecular del cancer hereditario en España. Para ello se propone:1.1. Proporcionar a los centros españoles de una cartera de servicios, para que cualquier centro sepa donde se realiza una prueba determinada.1.2. Desarrollo de protocolos para la realización de las técnicas de biología molecular. 1.3. Estandarización de las técnicas moleculares más comunes 1.4. Designar centros de referencia para cada una de las técnicas a desarrollar.1.5. Participar en la implementación de técnicas de nueva creación.1.6. Desarrollar y Potenciar los programas de control de calidad 1.7. Promover la realización de cursos de actualización de las técnicas de biología molecular.

2.Desarrollar y potenciar nuevas técnicas de diagnóstico molecular en tumores sólidos

3.Proporcionar servicio de análisis molecular a todos los grupos de la red.

3. Servicios, Técnicas y Metodología

• Metodología TaqMan y el sistema de detección ABI Prism 7700 para el estudio de expresión de genes así como para el genotipado de SNPs.
• Secuenciación automática por electroforesis capilar de ADN complementario o de fragmentos de PCR utilizando un secuenciador ABI-3100 o 310 de Applied Biosystems.
• PCR-DGGE: método de cribado de mutaciones mediante electroforesis de fragmentos de PCR en geles de acrilamida con gradiente desnaturalizante.
• Inmunohistoquímica (IHC) para el estudio de expresión de proteínas en el tejido tumoral embebido en parafina y en micro arrays de tejido (TMA), utilizando anticuerpos mono y policlonales
• Técnica de hibridación, ligación y amplificación múltiple (MLPA) para el estudio de grandes reordenamientos genicos, análisis por electroforesis capilar en un equipo secuenciador ABI 310 o 3100 de Applied Biosystems y el software genescan
• Uso de la electroforesis capilar y el análisis por Genescan software para el estudio de fragmentos de ADN (microsatélites, fragmentos de distinto tamaño, deleciones e inserciones conocidas...) marcados fluorescentemente
• Técnica de Zimografia para la determinación de la actividad gelatinasa de las proteínas
• Técnicas de análisis genómico utilizando distintas plataformas

4. Grupos que contribuyen a este programa/plataforma

La plataforma de diagnostico molecular está compuesta por seis grupos con una gran experiencia en el área de diagnóstico y pronostico de los tumores de mama, colon y pulmón. Los componentes del grupo participan en proyectos de investigación relacionados con este campo. Además colaboran con centros de reconocido prestigio tanto nacional como internacional.

Hospital Clínico San Carlos, Madrid. Subcordinadora Dra Trinidad Caldés,

Instituto Catalán de Oncología, Hospitalet de Llobregat, Barcelona Dr Gabriel Capellá,.

CNIO, Madrid Dra Montserrat Sanchez Céspedes.

Hospital German Trias i Pujol, Badalona (Barcelona).Dr Rafael Rosell,

Hospital Central de Asturias / IUOPA. Oviedo Dra Milagros Balbín,

UCM/HCSC, Madrid, Dra Pilar Iniesta

La actividad de estos grupos durante el desarrollo del programa en los proximos 4 sera la siguiente

- Cáncer hereditario

• Síndrome mama/ovario: estudio de mutaciones y grandes deleciones en los genes BRCA1, BRCA2. Centro referencia: Hospital Clínico San Carlos Madrid
• Cáncer colorrectal hereditario no polipósico: estudio de mutaciones y grandes deleciones en hMLH1, hMSH2, hMSH6 y hPMS2. Estudio de la expresión de las proteínas MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2. Centro de Referencia : Hospital Clínico San Carlos Madrid

• Poliposis Adenomatosa Familiar : estudio de mutaciones y grandes deleciones en el gen APC. Centro de referencia: Instituto Catalán de Oncología Barcelona
• Síndrome de Li-Fraumeni: estudio de mutaciones en el gen P53. Centro de referencia: Instituto Catalán de Oncología Barcelona

- Cáncer esporádico

• Diagnóstico molecular diferencial de tumores de colon con fenotipo mutador y no mutador: estudio de la inestabilidad a microsatélites y de expresión de las metaloproteinasas MMP3, MMP9, Cadherina E y Beta-catenina. Centro de referencia UCM/HCSC Madrid
• Diagnóstico molecular diferencial de tumores de pulmón, estudio de: a) determinaciones de perfiles de expresión, utilizando microarrays de cDNA y/o inmunohistoquímica en microarrays de tejidos; b) identificación de mutaciones en genes conocidos (EGFR, KRAS, p53, LKB1). Centro de referencia CNIO Madrid

- Estudio farmacogenómico de factores predictivos de respuesta y toxicidad en cáncer de mama, colon y pulmón

• Cancer de mama: estudio de expresión de TOPO II y ErbB2 en respuesta al tratamiento con Adriamicina. Centro de Referencia : Hospital Clínico San Carlos Madrid

• Cáncer de colon: estudio de expresión de TS, TP, DPD y ERCC1 en relación a la respuesta de 5- Fluoro-uracilo. Centro de Referencia Hospital German Trias y Pujol, Badalona (Barcelona). Hospital Clinico san Carlos Madrid.
• Cáncer de pulmón: estudio de las mutaciones en el dominio Tirosina Kinasa del EGFR en relación con la respuesta a erlotinib. Centro de Referencia Hospital German Trias y Pujol, Badalona (Barcelona). Hospital Clinico San Carlos
• Cancer Gastrointestinal (Gist): estudio de mutaciones en el gen c-Kit en relación con la respuesta a Imatinib. Centro de Referencia Hospital German Trias y Pujol, Badalona (Barcelona).